نيوڪليڪ ايسڊ جي ٺاھڻ کي سولڊ فيز سيالڪ امائيڊ ٽرائگليسرائڊ طريقي سان ڪيو ويندو آھي، جنھن ۾ ڊي اين اي جي 3′ پڇاڙي کي مضبوط مرحلي واري سبسٽرٽ تي متحرڪ ڪيو ويندو آھي ۽ نيوڪليوٽائڊس کي 3′ کان 5′ طرف ۾ شامل ڪيو ويندو آھي جيستائين مطلوب ڊي اين اي فريگمينٽ ٺھيل نه ٿي وڃي. .هي ڊي اين اي پوليمريز جي ايپليڪيشن ذريعي ڊي اين اي جي جوڙجڪ کان مختلف آهي.
پهرين بيس جي 3′ پڇاڙي کي سي پي جي تي ٺهڪندڙ دوران متحرڪ ڪيو ويندو آهي، ايندڙ بيس جو 5′-OH ڊي-پي-ٽوليل ٽرائل ڊي ايم ٽي سان محفوظ آهي، بيس تي امينو گروپ بينزوڪ ايسڊ ۽ 3′ سان محفوظ آهي. -OH وري هڪ امينو فاسفيٽ مرڪب سان چالو ڪيو ويندو آهي.1 بيس جي 5 5′-OH جو 1 بيس ۽ 3′-OH ايندڙ بيس جو هڪ فاسفائيٽ ٽرائگليسرائيڊ ٺاهي ٿو، جنهن کي پوءِ آئوڊين سان آڪسائيڊ ڪيو وڃي ٿو فاسفيٽ ٽرائگليسرائيڊ ۾، ٻئي بيس 5′-OH تي حفاظتي مادو ڪڍيو ويندو آهي. dichloroacetic acid DM cycles کي شامل ڪندي ايندڙ بيس جي اضافي ذريعي، ۽ synthesis کان پوءِ 5′-OH تي رکيل محافظ کي ڪمزور تيزاب سان هٽايو ويندو آهي، ٽڪڙي کي مرڪوز امونيم هائيڊروڪسائيڊ سان سڪل رين کان ڌار ڪيو ويندو آهي، محافظ کي بنيادي مان هٽايو ويندو آهي. امونيم هائيڊروڪسائيڊ کي گرم ڪرڻ سان، امونيم هائيڊروڪسائيڊ کي هٽايو ويندو آهي، ٽڪڙو ويڪيوم خشڪ ڪيو ويندو آهي، ۽ نيوڪليڪ ايسڊ کي مائع ڪروميٽوگرافي يا PAGE ذريعي صاف ڪيو ويندو آهي.
Oligo Synthesis جا مرحلا
بند ڪرڻ
جي5 آخر DMT حفاظتي گروپ TCA حل شامل ڪندي هٽايو ويو آهي.
چالو ڪرڻ
ايڪٽيويٽ کي oligonucleotide monomer سان ملائي فعال oligonucleotide monomer intermediate ٺاهڻ.
ملائڻ
5-ٽرمينل هائيڊروڪسيل گروپ فعال oligonucleotide انٽرميڊيٽ سان رد عمل ڪري ٿو مخالف پيدا ٿيندڙ ڪنڊينسيشن رد عمل ۾ هڪ غير مستحڪم فاسفائيٽ ٽرائگليسرائيڊ بانڊ ٺاهڻ لاءِ.
ڪيپنگ
ڪيپنگ ايجنٽ جو اضافو اضافي هائيڊروڪسيل گروپن سان گڏ ايڪٽيليشن ڪيپنگ رد عمل انجام ڏئي ٿو جيڪي ڪنڊينسيشن رد عمل ۾ شامل نه آهن.
آڪسائيڊشن
آئوڊين جي حل جو اضافو پاڻي تي مشتمل غير مستحڪم فاسفائيٽ بانڊز سان آڪسائيڊشن ذريعي مستحڪم فاسفورڪ ايسڊ ٽرائگليسرائيڊ بانڊ ٺاهي ٿو.
Cyanoethyl Cleavage
nucleic امل پيداوار synthesis کان پوء، DEA حل جي اضافي سان cyanoethyl گروپ phosphate triglyceride بانڊ مان هٽايو.
ڦاٿل ۽ بچاءُ
نيوڪليڪ ايسڊ جي ٽڪرن کي مضبوط مرحلو ڪيريئر مان ڪٽيو ويندو آهي هڪ مرڪوز امونيم هائيڊروڪسائيڊ محلول شامل ڪندي ۽ پوءِ گرم ڪيو ويندو آهي ته جيئن حفاظتي گروپن کي بيس جي هائيڊروجن بانڊن مان هٽايو وڃي.
پوسٽ جو وقت: نومبر-21-2022